微信公众号

扫描二维码
医学+优质原创科普

微信小程序

微信扫码
在手机上浏览本网站

免疫荧光检查

概述

免疫荧光检查(immunofluorescence exa分钟ation)是将荧光素与抗体连接成荧光抗体,再与待检标本中的抗原反应,将反应物置荧光显微镜下观察抗原抗体复合物散发的荧光,借此对标本中的抗原进行鉴定和定位。

原理

免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合,检查特异蛋白抗原在组织或细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出,从而可对抗原进行细胞定位。

检查方法

免疫荧光检查可分直接法、间接法、夹心法和补体法。
1. 直接法
将标记的特异性荧光抗体,直接加在抗原标本上,经一定的温度和时间的染色,用水洗去未参加反应的多余荧光抗体,室温下干燥后封片、镜检。
(1)滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待检标本片上,10分钟后弃去,使标本保持一定湿度。
(2)滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液,使其完全覆盖标本,置于有盖搪瓷盒内,保温一定时间(参考:30分钟)。
(3) 取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS冲洗后,再按顺序经过0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸3~5 分钟,不时振荡。
(4)取出玻片,用滤纸吸去多余水分,但不使标本干燥,加一滴缓冲甘油,以盖玻片覆盖。
(5)立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度来判断免疫复合物的多少,常用半定量法,(-)阴性,无荧光;(±)高倍镜下似乎可见;(+)低倍镜下似乎可见,高倍镜下明显可见;(++)低倍镜下明显可见,高倍镜下清晰可见;(+++)低倍镜下清晰可见,高倍镜下耀眼;(++++)低倍镜下耀眼,高倍镜下刺眼。
2. 间接法
如检查未知抗原,先用已知未标记的特异抗体(第一抗体)与抗原标本进行反应,用水洗去未反应的抗体,再用标记的抗抗体(第二抗体)与抗原标本反应,使之形成抗原—抗体—抗体复合物,再用水洗去未反应的标记抗体,干燥、封片后镜检。如果检查未知抗体,则表明抗原标本是已知的,待检血清为第一抗体,其它步骤的抗原检查相同。
(1)滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于已知抗原标本片,10分钟后弃去,使标本片保持一定湿度。
(2)滴加以0.01mol/L,pH7.4的PBS适当稀释的待检抗体标本,覆盖已知抗原标本片。将玻片置于有盖搪瓷盒内,37℃保温30分钟。
(3)取出玻片,置于玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS冲洗1~2次,然后按顺序过0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸5分钟,不时振荡。
(4)取出玻片,用滤纸吸去多余水分,但不使标本干燥,滴加一滴一定稀释度的荧光标记的抗人球蛋白抗体。
(5)将玻片平放在有盖搪瓷盒内,37℃保温30分钟。
(6)重复操作步骤(3)。
(7)取出玻片,用滤纸吸去多余水分,滴加一滴缓冲甘油,再覆以盖玻片。
(8)荧光显微镜高倍视野下观察,结果判定同直接法。

临床意义

1.直接法
(1)细胞间荧光提示天疱疮
(2)基底膜荧光带:在系统性红斑狼疮盘状红斑狼疮的皮损,均可见颗粒状的以IgG为主的带状分布。在类天疱疮为线状的以IgG为主的带状分布。
(3)在真皮内血管壁见到圈状荧光提示血管炎
2.间接法
抗核抗体阳性可见于以下疾病。
(1)风湿性结缔组织病红斑狼疮硬皮病干燥综合征、类风湿性关节炎等。
(2)增生性疾病:高球蛋白血症性紫癜、巨球蛋白血症、淋巴瘤慢性白血病、癌肿等。
(3)感染性疾病:结核病、瘤型麻风、组织胞浆菌病。
抗核抗体本身并非特异,滴度和核型对诊断也有重要参考价值。因此除定性外,还应结合滴度、核型及临床体征才具有较大价值。
3.补体结合法
常用来检测患者的自身抗体,如妊娠疱疹患者。

温馨提示: 以上内容仅供参考,具体诊疗请遵循医生指导。 百科名医版权所有,未经许可不得转载。
相关视频
更多
相关文章
更多
概述
原理
检查方法
临床意义